تست کاتالاز:
در رنجیره ی انتقال الکترون که در غشای سیتوپلاسمی باکتری ها قرار دارند،آنزیم سیتوکروم اکسیداز وجود دارد.سیتوکروم اکسیداز آنزیمی تنفسی است و هیدروژن و اکسیژن راترکیب کرده و مولکول آب ایجاد می کند.در متابولیسم باکتری های هوازی،همیشه آب تولید نمی شود و در بعضی موارد سوپر اکسید یا رادیکال آزاد اکسیژن تولید می شود که یون فوق العاده فعالی است و با مولکول های داخل سلولی واکنش داده و به آنها آسیب می رساند.آنزيم كاتالاز باعث تجزيه پراكسيد هيدروژن به آب و اكسيژن مي‌گردد. پراكسيد هيدروژن يك محصول متابوليك سمي براي باكتريهاست. تمام اعضاء خانواده استافيلوكوك كاتالاز –مثبت هستند، در صورتي كه اعضاء جنس استرپتوكوك كاتالاز – منفي مي‌باشند. همچنين آزمايش كاتالاز مي‌تواند ليستريا منوسيتوژن (كاتالاز – مثبت) را از استرپتوكوك بتاهموليتيك متمايز كند. بيشتر گونه‌هاي نايسريا كاتالاز – مثبت هستند. همچنين از آزمايش كاتالاز مي‌توان جهت تمايز بين گونه‌هاي باسيلوس (كاتالاز – مثبت) از گونه‌هاي كلوستريديوم (اغلب كاتالاز – منفي) كمك گرفت. آزمايش كاتالاز را مي‌توان بر روي مقدار بسيار كمي از باكتريهاي رشد نموده بر روي سطح آگار انجام داد.
اصول: آنزيم كاتالاز، پراكسيد هيدروژن را به آب و اكسيژن مي‌شكند. اگر مقدار كمي از ارگانيسم‌هاي توليد كننده اين آنزيم را با آب اكسيژنه مجاور نمائيد، بلافاصله حباب‌هاي اكسيژن آزاد مي‌شود.
روش انجام تست کاتالاز:
1- کلنی برداشت شده از محیط کشت را روی لام حاوی آب مقطر قرار داده و گسترش
تهیه کنید.
2- یک قطره از پراکسید هیدروژن را بر روی لام ریخته و با میکرورگانیسم کاتالاز
مثبت مجاور می کنیم.
(بلافاصله حباب های اکسیژن آزاد می شود.)
- استافيلوكوك ها، كاتالاز مثبت هستند و مقدار زيادي حباب‌هاي گاز اكسيژن توليد مي‌كنند. استرپتوكوك‌ها كاتالاز منفي مي‌باشند و هيچ حباب گازي را توليد نمي‌كنند.
توصيه مي‌شود كه آزمايش كاتالاز بر روي كلني هائي كه در محيط‌هاي فاقد خون رشد نموده
اند انجام گردد. گلبولهاي قرمز مقداري آنزيم كاتالاز دارند كه واكنش ضعيفي را در آزمايش كاتالاز ايجاد مي‌كنند. براي كنترل آزمايش كاتالاز در اين موارد، مقداري كلني ارگانيسمي را كه بر روي محيط خوندار رشد نموده را در نقطة مجزائي از سطح اسلايد قرار مي‌دهند وبه آن آب اكسيژنه اضافه مي‌كنند. اگر واكنش كاتالاز به طور قابل توجهي قويتر از واكنش در محيط آگار فاقد خون باشد آزمايش كاتالاز مثبت در نظر گرفته مي‌شود. برخي از ارگانيسم‌ها در آزمايش كاتالاز واكنش ضعيفي را ايجاد مي‌كنند كه ممكن است از چشم تكنولوژيست دور بماند. در اين موارد مقداري از كلني ارگانيسم بر روي محيط فاقد خون را روي اسلايد قرار داده و يك قطره آب اكسيژنه 3% به آن اضافه مي‌كنيم. سپس سريعاً يك لامل را روي آن قرار مي‌دهيم. تجمع حباب‌هاي اكسيژن در زير لامل و تشكيل حباب‌هاي بزرگ به خوبي قابل مشاهده خواهند بود.
نظرات شما عزیزان:
تبادل
لینک هوشمند